当前位置:主页>亚博体育app下载安装苹果>

wen

海螺协同办公系统:2018年肥东县春季猪口蹄疫免疫抗体水平检测与分析

亚博体育app下载安装苹果发布时间:2018-11-27 阅读:

摘 要:为准确掌握2018年肥东县春季猪口蹄疫防疫工作成效,客观评价防疫质量,确保全县亚博体育app下载安装苹果业健康、稳定、持续发展,在肥东县18个乡镇随机采集部分猪血清,采用酶联免疫液相阻断法检测猪口蹄疫免疫抗体。结果表明:肥东县春季猪口蹄疫整体免疫效果较好,但各乡镇散亚博体育app下载安装苹果免疫抗体水平不均衡,免疫效果差距明显,仍存在发生流行口蹄疫疫情的隐患。通过分析个别乡镇免疫质量不佳的原因,对提高猪口蹄疫免疫水平进行了探讨,希望为有效提高猪口蹄疫免疫抗体水平提供依据。

关键词:猪口蹄疫;抗体检测;免疫抗体水平

中图分类号 S852.4 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2018)14-0081-03

口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的急性、热性、高度接触性传染病,其易感动物多达70多种,主要以牛、猪、羊等偶蹄动物为主。该病流行速度快,可通过空气远距离传播,发病率和死亡率非常高,是目前危害养殖业健康发展的主要疾病之一。近年来,通过贯彻预防为主的策略,猪口蹄疫的大面积流行已经得到了有效的控制。肥东县以春秋2季集中免疫和及时补免相结合,按照免疫程序,对健康的猪每头2mL肌肉注射进行免疫接种,以避免口蹄疫疫情的发生。接种疫苗为口蹄疫O型(生产厂家为内蒙古必威安泰生物科技有限公司,生产批号为,2~8℃保存)。为掌握各乡镇春季集中免疫的效果,肥东县预防控制中心于2018年5月在肥东县18个乡镇随机采集部分猪血清,用酶联免疫液相阻断法检测猪口蹄疫抗体,旨在为今后的防疫决策提供有效依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 猪血清 270份,其中散养户90份,养殖场170份。根据各乡镇的养殖规模和养殖方式,随机采集于肥东县18个乡镇的农村散养户和18个规模场,血清无胶冻,无溶血、血清经离心吸取上层清液备用。

1.1.2 免疫疫苗 猪口蹄疫O型灭活苗,批号20180303(内蒙古必威安泰生物科技有限公司生产)。

1.1.3 检测试剂 口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒(FMDV-O包被板、酶结合物、抗体溶液、浓缩病毒抗原、浓缩样品稀释液、阴性对照、阳性对照、显色液A、显色液B、终止液、浓缩洗涤液),批号为E180402,购自洛阳莱普生信息科技有限公司。

1.1.4 试验器材 单道移液器及枪头、8道移液器及枪头、离心机、微量振荡器、生化培养箱、酶标仪。

1.2 方法 检测依据—GB/T18935-2003。(1)洗涤液配制:将浓缩洗涤液(25×)用蒸馏水25倍稀释。(2)样品稀释液配制:将浓缩样品稀释液(5×)用蒸馏水5倍稀释。(3)稀释浓缩病毒抗原:使用配制好的洗涤液300倍稀释浓缩病毒抗原。(4)A1~A10,E1~E10孔各加175μL样品稀释液(1×),A11,A12,B12孔各加100μL的样品稀释液(1×),B1~B11,C1~C11,D1~D11,F1~F11,G1~G11,H1~H11,E11孔各加100μL的样品稀释液(1×)。(5)A1~A10,E1~E10孔各加25μL的待检样品,A11孔加100μL的阳性对照,A12孔各加100μL的阴性对照,吹打混匀,待检样品从A1~A10分别以100μL/孔的量从A到D连续2倍稀释,E1~E10分别以100μL/孔的量从E到H连续2倍稀释。(6)将以上稀释后的液体50μL/孔转移到包被板相应孔。(7)样品孔、阳性、阴性孔各加入稀释后的病毒抗原50μL/孔,E12,F12,G12,H12每孔加入100μL,37℃,温育30min。(8)取出,将各孔的液体弃入废液筒,用300μL洗涤液洗涤板孔,共洗涤5次。每次洗涤后应弃去孔内液体。在最后1次洗涤液弃去后,将孔中残留的洗涤液在吸水纸上拍干。(9)加入抗体溶液,50μL/孔,继续加酶结合物,50μL/孔,振荡混匀,贴封板膜,37℃,温育30min。(10)重复步骤(8),按加混合显色液100μL/孔(显色液A和显色液B按1:1混合),37℃避光温育15min。(11)每孔再加入50μL终止液,终止反应。测量并记录样品和对照的OD值(450nm),15min内读值有效。(12)试验成立判断。病毒抗原对照OD值应在2.0±1.0范围内;阳性对照抗体效价应在1∶1024±1滴度以内;阴性对照抗体效价应<1∶8。(13)结果判定:病毒抗原对照4孔,弃去最高和最低OD值,计算剩余2孔的平均OD值,再除以2,既得50%对照值,該值即为临界值,表示阻断50%反应的对照OD值。待检样品OD值>临界值,判为阴性;待检样品OD值≤临界值,判为阳性。

2 结果与分析

2.1 各乡镇猪口蹄疫免疫抗体水平不均衡,免疫效果差距明显 从表2可以看出,肥东县整体猪口蹄疫免疫抗体水平一般。石塘、包公、陈集、店埠、民族、马湖、元疃等7个乡镇免疫抗体合格率达到100%,梁园镇免疫合格率达到93.3%,但梁园、白龙2个乡镇抗体合格率未达到国家规定标准,而古城、杨店、众兴、张集、撮镇、响导、桥集、长临等8个乡镇免疫抗体合格率为0。由此可以看出,各乡镇之间猪口蹄疫抗体免疫水平极不均衡,免疫效果差距明显,抗体水平低的乡镇仍然存在发生流行口蹄疫疫情的风险,需要采取补免措施,提高免疫抗体水平,确保免疫效果。

3 讨论与建议

3.1 讨论 通过本次调查研究表明,肥东县一部分乡镇抗体免疫效果很好,但仍存在不少乡镇免疫效果较差的情况,其免疫抗体效果需要进一步提高。究其原因:一是免疫程序不合理。很多养殖场在春季根本不接种口蹄疫疫苗,只在秋季接种(笔者在走访养殖场中经常发现这种情况),这是导致免疫抗体合格率为0的主要原因;二是疫苗因素。疫苗运输、贮藏等不符合要求,造成疫苗失效,从而降低免疫质量;三是接种人员因素。集中免疫期间,防疫员少、养殖分散、工作任务重强度大,免疫操作不规范(如接种剂量、打飞针等因素影响免疫质量);四是动物因素。免疫时动物本身不健康、有病或免疫力低下导致免疫不成功。

3.2 建议

3.2.1 坚持集中免疫和及时补免相结合,切实提高免疫密度 肥东县猪养殖方式以小规模养殖为主,此次春季集中免疫过程中存在问题,主要集中在散养户和小规模养殖场。必须加强小规模养殖户的免疫意识,提高小型养殖场的口蹄疫免疫密度与质量,才能有效控制口蹄疫的发生于流行。一定要狠抓春秋两季防疫,通过实验室的抗体监测,及时掌握集中免疫效果情况,做到及时补免。

3.2.2 全面规范免疫档案管理 肥东县动物卫生监督所要在平时的监督检查中,做好养殖场的养殖档案管理工作,指导养殖户准确的记录养殖消息,真正实现全程监管。

3.2.3 加大对基层防疫工作的投入 一是完善乡镇防疫冷链储备,使疫苗贮藏与运输都按规定进行,保证疫苗质量;二是肥东县动物预防控制中心在春秋两季集中免疫开始前,必须对防疫员进行培训,采取集中培训和现场演示相结合的方法,就疫苗的保存、稀释比例、注射剂量、注射部位、注意事项等方面进行培训和操作,直到防疫员全部熟练掌握,以保证集中免疫的顺利完成。

(责编:张宏民)